肺炎克雷伯氏菌漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

作者：王建玲; 桂爽; 付禹; 张妤彤; 郑东; 路福平; 刘逸寒^*

来源：天津科技大学学报, 2019, 34(01): 12-17.

DOI：10.13364/j.issn.1672-6510.20170190

• 漆酶
• 毕赤酵母
• 异源表达
• 酶学性质

以肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)基因组为模板,通过PCR扩增得到其漆酶基因lac;基于毕赤酵母密码子偏爱性优化后,得到新型漆酶基因lacm;将其与大肠杆菌–毕赤酵母(E. coli-P. pastoris)穿梭表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K-lacm;将该质粒转化毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中,实现该漆酶的胞外分泌表达,发酵液中重组漆酶(rLACM)活力达0.37 U/m L.经对rLACM酶学性质分析表明:rLACM的最适温度为70℃,最适pH为8.0,在30～70℃、pH 5.0～9.0活力稳定.

• 单位
  工业酶国家工程实验室; 生物工程学院; 天津科技大学; 工业发酵微生物教育部重点实验室