人HIF1α基因重组逆转录病毒载体构建及鉴定

作者：段小军; 杨柳; 董世武; 周跃; 唐康来; 胡鸢

来源：第三军医大学学报, 2004, (18): 1639-1642.

• 逆转录病毒
• 缺氧诱导因子-1
• 基因克隆

目的　构建人缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)基因重组逆转录病毒载体 ,并观察其对NIH3T3细胞感染效率。方法　采用基因工程技术 ,经过 2次亚克隆将HIF 1α基因片段克隆至含IRES EGFP逆转录病毒载体上 ,鉴定后用脂质体法转染PT67细胞进行包装、扩增 ,最后用重组逆转录病毒感染NIH3T3细胞。其中采用PCR方法对重组载体进行鉴定 ,利用绿色荧光蛋白作为报告基因 ,对病毒滴度和感染效率进行检测。结果　酶切鉴定及PCR结果与HIF 1α基因重组逆转录病毒载体的预期结果一致 ,病毒滴度达 ( 1 4× 10 6pfu/ml) ,并对NIH3T3细胞有强感染能力。结论　应用基因工程技术 ,成功构建了含人HIF 1α基因重组逆转录病毒载体 ,为应用于治疗性血管生成创造了条件

• 单位
  新桥医院; 第三军医大学西南医院; 解剖学教研室