沉默HOXA10基因表达联合川芎嗪可逆转K562/ADR细胞的多药耐药性

作者：贾秀红; 伊英杰; 任秀敏; 王建勇; 李有杰

来源：肿瘤, 2016, 36(06): 635-643.

• 白血病
• 抗药性,多药
• RNA,小分子干扰
• 川芎嗪
• HOXA10基因

目的 :研究靶向沉默人慢性髓系白血病耐多柔比星(adriamycin,ADR)细胞株K562/ADR中同源盒A10(homebox A10,HOXA10)基因表达后联合川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对逆转K562/ADR细胞多药耐药性的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 :采用脂质体法将构建有靶向HOXA10基因的sh RNA重组表达载体p GPHI/GFP/Neo-HOXA10-sh RNA稳定转入K562/ADR细胞中,分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测对HOXA10 m RNA和蛋白表达的影响。实验分为6组:空白对照组、阴性对照-sh RNA(negative controlsh RNA,NC-sh RNA)组、HOXA10-sh RNA组、TMP单药组、NCsh RNA+TMP(2μg/m L)组和HOXA10-sh RNA+TMP(2μg/m L)组。采用MTT法检测各组细胞的逆转耐药倍数。FCM法检测细胞内ADR平均荧光强度的变化;蛋白质印迹法检测细胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)的表达。结果:p GPHI/GFP/Neo-HOXA10-sh RNA表达载体能有效抑制K562/ADR细胞中HOXA10 m RNA及蛋白的表达。HOXA10-sh RNA+TMP(2μg/m L)组K562/ADR细胞对ADR的逆转耐药倍数为5.08倍,均较HOXA10-sh RNA组和TMP单药组提高(P值均<0.05);细胞内ADR的平均荧光强度均较HOXA10-shR NA组和TMP单药组提高(P值均<0.05);P-gp和MRP1的表达水平均较HOXA10-shR NA组和TMP单药组明显下调(P值均<0.05)。结论 :靶向沉默HOXA10基因表达联合TMP能逆转K562/ADR细胞的多药耐药,两者间有协同作用,可为临床逆转白血病多药耐药提供重要的实验依据。

• 单位
  滨州医学院附属医院; 滨州医学院