RT-PCR结合高分辨率熔解曲线对两种致病菌的快速检测

作者：姚艳玲

来源：食品研究与开发, 2020, 41(04): 205-210.

• 实时聚合酶链式反应(RT-PCR)
• 高分辨率熔解曲线
• 金黄色葡萄球菌
• 单核增生李斯特氏菌
• 双重反应

为建立食品中金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特氏菌的双重快速检测方法。用缓冲蛋白胨水(buffered peptone water,BPW)对两种目标菌进行增菌培养,采用直接提取法提取样本DNA,比较实时聚合酶链式反应体系(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)中的退火温度,调整高分辨率熔解曲线(high-resolution melting curve,HRM)分析条件,建立同时检测金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特氏菌的方法。结果表明,PCR扩增最佳退火温度为58℃,两种目标菌的Tm值分别为金黄色葡萄球菌77.05℃,单核增生李斯特氏菌79.39℃;试验灵敏度分别可以达到102、103 CFU/g。