用电压钳检测烟碱型乙酰胆碱受体导电孔道的重要位点

作者：薛奋勤; 李华; 刘丽娜; 许晴; 薛冰; 魏华^*

来源：基础医学与临床, 2021, 41(09): 1309-1312.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2021.09.006

• α7烟碱受体
• 双电极电压钳
• 离子导电孔道

目的利用双电极电压钳技术检测组成人烟碱型乙酰胆碱受体离子导电孔道的主要氨基酸位点。方法用定点突变的方法将人alpha 7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAChR)亚基跨膜区段M2的氨基酸(Leu248–Ala258)逐一突变为亲水性的丝氨酸,随后利用cDNA质粒体外转录获得cRNA,并将单个突变体的cRNA注射到非洲爪蟾卵母细胞中。注射1～3 d后,利用双电极电压钳检测野生型(WT)α7 nAChR及各突变体的功能。结果获得跨膜区段M2亲水性突变后,与WT相比,发现4个亲水性突变体(L248、V252、L255和L256)对激动剂乙酰胆碱(ACh)的EC50值明显降低(P<0.001);剂量-反应曲线向左显著移动,脱敏程度明显减轻(P<0.01);而且它们对ACh的敏感性与脱敏程度呈正相关性(R2=0.98)。结论α7 nAChR亚基的M2跨膜区段的4个位点L248、V252、L256和L255是组成其导电孔道的主要氨基酸位点。

• 单位
  中心实验室; 首都医科大学