巨噬细胞条件性GP73基因敲除小鼠的构建及鉴定

作者：黄庆; 甄兰; 赵桂霖; 赵汝舟; 叶新萍^*; 吴飞翔^*

来源：中国癌症防治杂志, 2023, 15(06): 630-636.

• 高尔基体蛋白73
• 巨噬细胞
• Cre/LoxP重组系统
• 条件性敲除
• 基因型鉴定
• 小鼠模型

目的构建并鉴定巨噬细胞条件性高尔基体蛋白73(golgi protein 73,GP73)基因敲除小鼠，为进一步研究GP73调控巨噬细胞功能影响肿瘤性疾病的发生发展提供动物模型。方法基于Cre/LoxP重组系统构建GP73flox/+小鼠，通过GP73 flox/+小鼠雌雄自交得到GP73flox/flox小鼠。将GP73flox/flox小鼠与Lyz2-Cre+小鼠杂交，得到GP73flox/+Lyz2-Cre+小鼠，再将其与GP73flox/flox小鼠杂交，最终得到基因型为GP73flox/flox Lyz2-Cre+的巨噬细胞条件性GP73基因敲除小鼠(MKO小鼠)；以GP73flox/flox Lyz2-Cre-小鼠作为对照组小鼠(GP73fl/fl小鼠)。采用PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠flox及Cre基因型。采用实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)分别从mRNA水平和蛋白水平验证小鼠巨噬细胞GP73敲除效果及组织特异性。计算小鼠各组织质量与体重的比值以分析小鼠的生长发育情况，并检测小鼠血生化指标。结果通过基因鉴定、mRNA水平及蛋白水平证实巨噬细胞条件性GP73基因敲除小鼠构建成功。qPCR检测显示，与GP73fl/fl小鼠相比，MKO小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)和腹腔原位巨噬细胞(peritoneal macrophages,PM)中GP73 mRNA水平均降低(P<0.0001);Western blot检测结果显示，GP73蛋白在MKO小鼠BMDMs和PM中的表达水平均较GP73fl/fl小鼠明显降低，但在肝脏、肾脏及胸腺组织中GP73蛋白表达水平无显著差异。与GP73fl/fl小鼠相比，MKO小鼠心、肝、脾、肺、肾、棕色脂肪及白色脂肪组织重量与体重之比无差异，各组织无形态学差异。血生化检测结果显示，MKO小鼠与GP73fl/fl小鼠的各项血生化指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建巨噬细胞条件性GP73基因敲除小鼠模型，为深入研究GP73调控巨噬细胞功能在肿瘤性疾病中的作用和机制提供良好的动物模型。

• 单位
  广西医科大学附属肿瘤医院; 湖南中医药大学第一附属医院; 广西医科大学