小鼠TSC21基因敲除打靶载体的构建和胚胎干细胞同源重组克隆的鉴定

作者：殷正伟; 王朝亮; 张天标; 杨超; 张卫星^*

来源：郑州大学学报(医学版), 2018, 53(04): 511-515.

DOI：10.13705/j.issn.1671-6825.2017.12.046

• TSC21
• 基因敲除
• 打靶载体
• 同源重组
• 小鼠

目的:构建小鼠TSC21基因敲除打靶载体,电转胚胎干细胞(ES细胞)并筛选同源重组阳性克隆。方法:订购含TSC21基因的129 BAC克隆,PCR扩增2对同源臂,利用PL253、PL452质粒进行目的片段的连接和同源重组,构建打靶载体并电转ES细胞,利用Southern blot方法鉴定同源重组阳性ES细胞克隆。结果:构建了TSC21基因敲除打靶载体,经过限制性内切酶鉴定及DNA测序鉴定,TSC21基因敲除打靶载体构建成功。Southern blot结果显示成功筛选到打靶序列同源重组阳性ES细胞克隆。结论:TSC21基因敲除打靶载体构建成功并筛选到同源重组阳性ES细胞克隆。

• 单位
  郑州大学第一附属医院