鸡白介素10(chIL-10)单克隆抗体的制备及鉴定

作者：高俊峰; 柳亚楠; 王永强; 曹红; 李晓齐; 郑世军

来源：中国兽医杂志, 2016, 52(12): 3-6.

• 鸡IL-10
• 原核表达
• 单克隆抗体

为制备鸡白介素10(chIL-10)单克隆抗体,以常规分子生物学技术从禽细胞系MDCC-MSB1克隆chIL-10基因,将去信号肽chIL-10基因亚克隆至原核表达载体p ET-30a,并在大肠杆菌中表达,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经4次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合。将原核表达的GST-chIL-10融合蛋白作为包被抗原,利用间接ELISA筛选阳性克隆。阳性细胞株经3次亚克隆后,获得3株稳定分泌chIL-10抗体的杂交瘤细胞克隆,分别命名为4B2、4F3以及1E3。经间接ELISA测定,以上3株杂交瘤细胞腹水效价为1∶3.2×106,亲和力解离常数(Kd)分别为1.05×10-9、5.01×10-10以及7.59×10-10。抗体重链类型分别为Ig G2a、Ig G2a以及Ig G1。经Western Blot试验证明,3株单抗均能特异地识别原核或真核表达的chIL-10蛋白,4B2、4F3单抗识别的抗原表位区域为chIL-10 N端的1 aa52 aa,1E3识别的是N端的52 aa102 aa。这些单抗为鸡IL-10的检测及生物学功能研究奠定了基础。

• 单位
  农业生物技术国家重点实验室; 中国农业大学