伯氏疟原虫红细胞膜相关蛋白1缺失突变体的构建和鉴定

作者：魏超; 史小雨; 王倩^*

来源：天津医科大学学报, 2022, 28(02): 135-139.

• 伯氏疟原虫
• 输出蛋白
• 红细胞膜相关蛋白1

目的：研究伯氏疟原虫输出蛋白——红细胞膜相关蛋白1(EMAP1)在疟原虫生长发育和侵染中的作用，构建EMAP1缺失的伯氏疟原虫突变体。方法：以pL0035质粒为载体，PCR扩增EMAP1编码区上游和下游序列作为同源臂，用酶切连接和无缝克隆的方法将两条同源臂分别插入pL0035，获得重组质粒pL0035-ΔPb EMAP1；利用疟原虫转染技术在伯氏疟原虫中敲除EMAP1，有限稀释法筛选EMAP1基因敲除的单克隆虫株，PCR和Southern印迹鉴定基因型；定制抗Pb EMAP1多克隆抗体，利用Western印迹鉴定EMAP1缺失疟原虫。结果：（1）成功构建用于敲除Pb EMAP1的重组质粒pL0035-ΔPb EMAP1。（2）获得能有效识别Pb EMAP1蛋白的抗体。（3）基因型和蛋白水平鉴定重组疟原虫为Pb EMAP1缺失的伯氏疟原虫单克隆虫株。结论：本研究构建的Pb EMAP1缺失伯氏疟原虫突变体，为研究Pb EMAP1在疟原虫发育和侵染中的作用提供了必要的工具。

• 单位
  基础医学院; 天津医科大学