RNAi沉默ERCC1基因对肺腺癌细胞顺铂敏感性的影响

作者：王巍炜; 巫正伟; 王德光; 张勇

来源：重庆医学, 2016, 45(28): 3904-3906.

• 遗传载体
• RNA干扰
• ERCC1
• 肺腺癌细胞

目的目的用包含切除修复交叉互补(ERCC1)基因特异RNA序列的慢病毒,将其转染入宣威肺腺癌细胞XWCL05中,沉默ERCC1基因表达,初步探讨其基因沉默效果及对顺铂敏感性的影响,为顺铂耐药逆转提供思路和依据。方法经293T细胞包装后构建ERCC1基因RNAi的慢病毒载体及阴性对照,分别使用XWCL05空白组(空白对照)、XWCL05-neg组(转染空载体)、XWCL05-RNAi组(转染ERCC1-RNAi慢病毒)。Western blot法检测转染前后XWCL05细胞中ERCC1蛋白的表达。12.5μg/mL顺铂作用48h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测顺铂对各组XWCL05细胞增殖抑制率的影响;流式细胞术检测各组中XWCL05细胞的凋亡率。结果 (1)Western blot结果显示,XWCL05-RNAi组中ERCC1蛋白表达水平显著低于XWCL05-neg组(P<0.05),而XWCL05-neg和XWCL05空白组差异无统计学意义(P>0.05)。(2)MTT法检测显示相同浓度顺铂作用下,XWCL05-RNAi组的增殖抑制率显著高于XWCL05-neg组和XWCL05空白组(P<0.05),而XWCL05-neg组。(3)流式细胞术检测结果显示,XWCL05-RNAi组凋亡率显著高于XWCL05-neg组和XWCL05空白组(P<0.05)。而顺铂作用后,各组凋亡率较前均显著升高(P<0.05),且XWCL05-RNAi组凋亡率显著高于其余两组。结论 ERCC1基因RNAi的慢病毒能够有效地沉默宣威肺腺癌细胞XWCL05中ERCC1基因的表达,并增强XWCL05对顺铂的敏感性。

• 单位
  昆明医科大学第三附属医院