迟钝爱德华菌环介导等温扩增检测方法研究

作者：何亚鹏; 李小龙; 刘鑫; 张树林; 杜迎春; 李博; 魏凯; 邹强军

来源：水产养殖, 2023, 44(01): 24-36.

• 迟钝爱德华菌
• 环介导等温扩增
• fimA基因

为了建立一套用于实验室及室外现场检测迟钝爱德华菌(Edwardsiella tarda, Et)的环介导等温扩增方法(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)，以迟钝爱德华菌的毒力基因fimA为靶基因设计特异性引物，以基因组DNA为模板，进行环介导恒温扩增，并对其特异性、灵敏性和临床检测进行了试验。结果显示，迟钝爱德华菌阳性样本反应呈现为荧光绿色，阴性样本不变色。该LAMP方法的最适反应温度为63℃；特异性试验表明仅迟钝爱德华菌样本发生反应，而杀鲑气单胞菌、嗜水气单胞菌、温气单胞菌和豚鼠气单胞菌均不发生反应；敏感性试验表明，该LAMP方法可检出浓度为2.16×10-5mg/L的迟钝爱德华菌的核酸。