circ-SFMBT2通过miR-224-5p/USP3轴对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响

作者：伍玉海; 戴大飞; 叶蕊; 于北北; 张书军; 陈晓鹏^*

来源：贵州医科大学学报, 2021, 46(06): 680-687.

DOI：10.19367/j.cnki.2096-8388.2021.06.010

• 肝肿瘤
• 癌
• 细胞增殖
• 细胞迁移分析
• 环状RNA
• SFMBT2基因
• 迁移

目的探讨环状RNA(circRNA) SFMBT2(circ-SFMBT2)通过miR-224-5p/USP3轴对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响。方法选取人肝癌细胞株Hep G2、SMMC7721、Huh-7、Sk-Hep-1及人正常肝细胞株LO2,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测circ-SFMBT2在5个细胞株中的表达,筛选出高表达circSFMBT2的人肝癌细胞株Hep G2和正常肝细胞株LO2进行后续实验,采用原位杂交实验检测circ-SFMBT2在Hep G2和LO2中的亚细胞定位;选取人肝癌细胞系Hep G2传代培养,利用Lipofectamine 2000为转染试剂进行转染,分为circ-SFMBT2转染对照组(circ-SFMBT2 NC,NC组)、circ-SFMBT2干扰组(si-circ-SFMBT2组)、miR-224-5p过表达组(mimic组)、USP3过表达组(si-circ-SFMBT2+USP3组)、miR-224-5p干扰组(si-circ-SFMBT2+inhibitor组)、miR-224-5p和USP3双过表达组(mimic+USP3组),分别采用细胞增殖(CCK-8)、克隆斑点形成及Transwell实验检测6组Hep G2细胞增殖和迁移能力,采用双荧光素报告实验检测circ-SFMBT2、miR-224-5p和USP3在Hep G2细胞中彼此之间的靶向关系。结果 qRT-PCR结果显示与正常肝细胞LO2比较,circ-SFMBT2在4株肝癌细胞中高表达,差异有统计学意义(P <0.05);原位杂交实验证实circ-SFMBT2存在于细胞质中;细胞增殖(CCK-8、克隆斑点实验)和迁移实验(Transwell实验)检测发现,si-circ-SFMBT2组细胞增殖和迁移能力较NC组降低(P <0.05),mimic组增殖和迁移能力较si-circ-SFMBT2+inhibitor组降低(P <0.05),mimic+USP3组细胞增殖和迁移能力较mimic组升高(P <0.05);双荧光素实验证实miR-224-5p和USP3是circ-SFMBT2的下游靶点。结论 circ-SFMBT2通过miR-224-5p/USP3轴参与了对肝癌细胞增殖和迁移的调控。

• 单位
  皖南医学院第一附属医院; 皖南医学院