紫杉醇通过自噬相关蛋白7介导的自噬抑制人主动脉平滑肌细胞增殖及迁移

作者：张铖; 刘润禹; 潘俊兵; 李杨欣; 林倩; 谢林灼; 陈厚洁; 孙晓磊^*

来源：中华实验外科杂志, 2023, 40(05).

• 紫杉醇
• 自噬
• 增殖
• 迁移
• 血管平滑肌

目的探究自噬在紫杉醇(PTX)抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及机制。方法使用紫杉醇作用人主动脉平滑肌细胞(HASMCs), 采用细胞计数盒(CCK-8)法和5-乙炔-2’-脱氧尿苷(EdU)掺入法检测紫杉醇对HASMCs的增殖能力的影响, 采用划痕实验检测紫杉醇对HASMCs迁移能力的影响, 蛋白质印迹法(Western blot)及利用GFP-RFP-LC3Ⅱ-HASMCs观察PTX对自噬关键蛋白LC3Ⅱ表达水平的影响;利用自噬相关蛋白7(ATG7)小干扰RNA转染HASMCs, 抑制自噬水平, 检测PTX对HASMCs增殖及迁移能力的作用。两组间比较采用t检验。结果在紫杉醇作用下, 其细胞活性在2.5 nmol/L组(0.669 ±0.010, t=17.620, P<0.01)及5 nmol/L组(0.535±0.012, t=22.300, P<0.01)时明显低于对照组(1.008±0.018);Edu阳性细胞率在2.5 nmol/L组(0.356±0.016, t=14.380, P<0.005)与5 nmol/L组(0.293±0.018, t=16.560, P<0.01)明显低于对照组(0.657±0.013);划痕愈合率在2.5 nmol/L组(0.096±0.012, t=8.367,P<0.01)与5 nmol/L组(0.065±0.008, t=11.900, P<0.01)明显低于对照组(0.238±0.012)。相较于对照组, 2.5 nmol/L及5 nmol/L浓度下PTX处理的GFP-RFP-LC3Ⅱ-HASMCs点状荧光颗粒表达明显增加, 电镜下观察到自噬囊泡明显增多。自噬蛋白LC3Ⅱ表达水平在PTX 2.5 nmol/L组(1.454±0.102, t=3.656,P<0.05)与5 nmol/L组中(1.770±0.075, t=7.604,P<0.005)明显高于对照组(1.014±0.065);P62蛋白表达水平在2.5 nmol/L组(0.884±0.028, t=3.086,P<0.05)与5 nmol/L组(0.791± 0.054, t=3.680, P<0.05)明显低于对照组(1.111 ±0.068)。抑制自噬关键基因ATG7表达后, 低表达ATG7的HASMCs在PTX 2.5 nmol/L组(1.117±0.017)及5 nmol/L(0.969± 0.020)组细胞活性明显高于正常表达ATG7的HASMCs 2.5 nmol/L组(0.722±0.010, t=19.720, P<0.01)及5 nmol/L组(0.651± 0.013, t=13.230, P<0.01);低表达ATG7的HASMCs在PTX 2.5 nmol/L组(0.513±0.014)及5 nmol/L (0.466±0.025)中Edu阳性细胞率相较于正常表达ATG7的HASMCs 2.5 nmol/L组(0.353±0.012, t=8.575, P<0.005)及5 nmol/L组(0.368±0.013, t=3.610, P<0.05)明显增加;低表达ATG7的HASMCs在PTX 2.5 nmol/L组(0.129± 0.007)及5 nmol/L组(0.121± 0.017)划痕愈合率相较于正常表达ATG7的2.5 nmol/L组(0.096± 0.012, t=2.429,P<0.05)及5 nmol/L组(0.065± 0.008, t=2.943, P<0.05)明显增加。结论紫杉醇通过ATG7介导的自噬抑制HASMCs的增殖和迁移, 可能是其抗心血管介入术后再狭窄的新机制。

• 单位
  西南医科大学