人睾丸特异表达基因TDRG1 shRNA表达载体的构建及其表达

作者：彭圣林; 阳建福; 陈厚仰; 郭小亮; 李东杰; 周华波; 甘宇; 蒋先镇; 汤育新

来源：中南大学学报(医学版), 2012, 37(10): 979-982.

DOI：10.3969/j.issn.1672-7347.2012.10.002

• 睾丸基因
• TDRG1
• RNAi
• shRNA
• NTERA-2细胞

目的:构建人睾丸基因TDRG1的shRNA表达质粒,并研究其在NTERA-2细胞中的表达。方法:设计合成有短发夹结构靶位TDRG1基因的寡核苷酸,经退火成双链,克隆至载体pGPU6/GFP/Neo中,构建TDRG1shRNA表达载体,得到重组质粒TDRG1-shRNA486,TDRG1-shRNA738,TDRG1-shRNA921和一个阴性对照,使用Lipofectamine 2000转染shRNA至NTERA-2细胞,应用RT-PCR法检测转染后NTERA-2细胞TDRG1 mRNA的表达水平。结果:经测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致。同时筛选到转染TDRG1-shRNA486的NTERA-2细胞TDRG1基因的mRNA表达水平明显抑制。结论:成功构建了人类睾丸基因TDRG1的shRNA表达载体,TDRG1-shRNA在NTERA-2细胞内成功表达。

• 单位
  中南大学湘雅三医院