艰难梭菌分离株快速鉴定和毒素检测的多重PCR方法的建立

作者：贾红兵; 王靖; 杨辉; 程颖; 卢金星; 鄢盛恺

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2011, 31(8): 755-759.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2011.08.020

• 艰难梭菌
• 聚合酶链反应
• 厌氧培养
• 酶联免疫吸附试验

目的 建立可同时进行艰难梭菌分离株菌种鉴定和毒素检测的多重PCR方法。方法 用于多重PCR中的3对引物分别为艰难梭菌的种特异性的磷酸内糖异构酶(triose phosphate isomerase，tpi)基因、毒素A基因部分序列、毒素B基因部分序列。艰难梭菌ATCC 9689等21株标准菌株和47株临床分离艰难梭菌分别被应用于多重PCR最低检出限、特异性评估试验和验证试验。同时，应用ELISA对47株分离株进行毒素A/B检测。结果 该多重PCR方法可检测到最低DNA浓度为0.5 pg/μ l，特异性为100％。47株艰难梭菌分离株中tpi基因均为阳性，其中毒素基因A(+)/B(+)为37株，毒素基因A（-）/B（-）为10株，未检出毒素基因A（-）/B(+)菌株。47株毒素A/B检测结果为20株阳性、27株阴性。毒素A/B阳性的20株菌均为多重PCR检测毒素基因A(+)/B(+)。结论 成功建立用于艰难梭菌的菌种鉴定和毒素分析结合为一体的多重PCR方法，对临床诊断艰难梭菌感染有着重要应用价值。

• 单位
  中国医学科学院北京协和医学院; 中日友好医院; 传染病预防控制国家重点实验室; 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所