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摘要
目的研究结核DNA疫苗肌肉注射加电转染不同免疫方案的免疫效果,获得DNA疫苗肌肉注射加电转染免疫的最佳方案。方法 40只BALB/c小鼠随机分为4组:(1)生理盐水组。(2)50μgAg85A DNA组。(3)100μgAg85A DNA组。上述3组分别肌肉注射加电转染免疫3次。(4)混合Ag85A DNA免疫组,第1和3次各肌肉注射加电转染10μgAg85A DNA,第2次肌肉注射加电转染100μg Ag85A DNA,每2周免疫1次。最后1次免疫后2周、6周每组各杀5只小鼠,用ELISA方法检测小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平;用流式细胞术检测小鼠全血单个核细胞分泌IFN-γ的Th1细胞和分泌IL-4的Th2细胞比值;用定量RT-PCR检测小鼠肌肉电转染部位Ag85A DNA的含量。用ELISA方法检测小鼠免疫前、第13次免疫后10 d小鼠血清特异性抗体水平。结果免疫结束后2周,小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ水平:混合Ag85A DNA免疫组[(703.66±394.74)pg/m1]和50μgAg85A DNA组[(648.60±439.41)pg/m1]明显高于生理盐水组[(70.58±108.76)pg/m1](t值分别为3.975、3.629,P值分别为0.0004、0.0010)和100μg Ag85A DNA组[(86.08±135.73)pg/ml](t值分别为3.878、3.532,P值分别为0.0005、0.0013),但混合Ag85A DNA免疫组和50μg Ag85A DNA组之间差异无统计学意义(t=0.3457,P=0.7318);全血单个核细胞内Th1/Th2细胞比值:混合Ag85A DNA免疫组(3.82±1.09)均显著高于生理盐水组(0.37±0.11)、50μgAg85A DNA组(1.20±0.80)、100μg Ag85A DNA组(1.10±0.60)(t值分别为2.980、2.260、2.352,P值分别为0.0058、0.0315、0.0257);肌肉注射加电转染部位Ag85A DNA含量:100μg Ag85A DNA组[(963.40±892.79)拷贝]显著高于50μgAg85A DNA组[(270.90±398.18)拷贝]和混合Ag85A DNA免疫组[(205.80±136.95)拷贝](t值分别为2.639、2.887,P值分别为0.0144、0.0081)。免疫结束后6周,小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ水平:混合Ag85A DNA免疫组[(238.43±258.90)pg/ml)]高于生理盐水组[(0±0)pg/m1]、50μgAg85A DNA组[(83.14±135.08)pg/ml]和100μg Ag85A DNA组[(163.83±207.13)pg/ml],但各组之间差异均无统计学意义(t值分别为1.4970、0.9750、0.4684,P值分别为0.1442、0.3369、0.6427);全血单个核细胞内Th1/Th2细胞比值:混合Ag85A DNA免疫组(4.67±5.05)显著高于生理盐水组(0.77±0.19)、50μgAg85A DNA组(1.23±0.74)和100μg Ag85A DNA组(0.51±0.49)(t值分别为3.199、2.971、3.610,P值分别为0.0033、0.0059、0.0011);肌肉电转染部位Ag85A DNA含量各组之间差异均无统计学意义。第2次免疫后,50μg Ag85A DNA组、100μgAg85A DNA组和混合Ag85A DNA免疫组血清抗Ag85A特异性IgG抗体均比第1次免疫后显著升高(F=7.17,P=0.0111),但3组之间差异无统计学意义。第3次免疫后,100μg Ag85A DNA组和混合Ag85A DNA免疫组血清抗Ag85A特异性IgG抗体比第2次免疫后略有升高,而50μg Ag85A DNA组略有降低,但3组之间差异无统计学意义。结论电转染可以使低剂量的DNA疫苗产生较好的免疫效果,低、高剂量混合免疫是DNA疫苗肌肉注射加电转染免疫的最佳方案。
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单位全军结核病研究所; 解放军第309医院
