鲍曼不动杆菌三价抗原融合蛋白的制备及其免疫原性研究

作者：董瑶; 吕琳曦; 关丽娜; 王朝莉; 冯莉; 谢勇恩^*

来源：实用医学杂志, 2020, 36(22): 3074-3078.

• 鲍曼不动杆菌
• SmpA
• Omp22
• NlpA
• 免疫原性
• 融合蛋白

目的制备鲍曼不动杆菌SmpA/Omp22/NlpA(1-128)三价抗原融合蛋白,免疫接种Balb/c小鼠后探究其免疫原性。方法通过人工合成结合PCR扩增法获取smpA/omp22/nlpA(1-384)融合基因,将该融合基因克隆到质粒载体pColdI中,构建重组质粒pColdI-SON。将该重组质粒转化E.coli BL21进行原核表达,并将纯化的重组蛋白与弗氏佐剂混合作为免疫原经背部皮下注射接种Balb/c小鼠,并于初次接种后第14、28天各加强免疫1次,同时设置佐剂对照组和PBS对照组。分别于末次免疫后第7、21天小鼠内眦取血分离血清,ELISA检测抗体滴度。分离免疫小鼠脾淋巴细胞,检测抗原刺激培养后脾细胞增殖活性及IFN-γ/IL-4的分泌情况。结果所构建的重组质粒大小约为5.9 kb,转化大肠杆菌后诱导表达并纯化出分子量约56 kDa的重组蛋白,免疫接种后在小鼠体内检测到高滴度的抗原特异性IgG抗体,小鼠脾淋巴细胞增殖活性明显高于佐剂及PBS对照组(P <0.001),免疫小鼠脾淋巴细胞经抗原刺激后所产生的IL-4水平明显高于对照组(P <0.01),而IFN-γ产生水平各组间无显著性差异。结论成功制备了鲍曼不动杆菌SmpA/Omp22/NlpA(1-128)融合蛋白,小鼠免疫接种后显示出较强免疫原性。

• 单位
  川北医学院