稳定表达T7RNA聚合酶IBRS-2细胞系的建立以及利用该细胞系对SVDV的体内拯救

作者：郑海学; 田宏; 靳野; 吴锦艳; 尚佑军; 刘湘涛; 谢庆阁

来源：生物化学与生物物理进展, 2008, (04): 449-456.

• T7RNA聚合酶
• IBRST7细胞系
• 假型病毒
• SVDV
• 病毒拯救
• 逆转录病毒载体
• 感染性克隆 T7 RNA polymerase(T7 RNAP)
• IBRS-2 cell
• pseudotype virus
• retroviral vector
• infectious clone

利用PCR从!溶原性细菌DE3中扩增出T7RNA聚合酶基因,定向克隆进逆转录病毒载体pBABEpuro,得到阳性重组质粒pT7BABEpuro.把该重组质粒与pVSV-G共感染GP2-293包装细胞系,形成假型病毒.通过polybrene介导假型病毒感染IBRS-2细胞,利用嘌呤霉素进行传代筛选,形成细胞系IBRST7.对不同代次的IBRST7细胞基因组进行PCR和RT-PCR鉴定,结果表明,T7RNA聚合酶基因在细胞传代过程中能稳定存在,并能表达目的蛋白的mRNA.为了鉴定T7RNA聚合酶在IBRST7细胞内是否具有转录活性,扩增口蹄疫病毒(FMDV)的内部核糖体进入位点(IRES)片段和E...

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 广东省农业科学院; 农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室