粟酒裂殖酵母SpTrz2蛋白全长和N端的原核表达与多克隆抗体制备

作者：刘金玉; 黄鹰^*

来源：浙江农业学报, 2021, 33(01): 34-42.

• 粟酒裂殖酵母
• SpTrz2蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

采用生物信息学方法分析粟酒裂殖酵母SpTrz2蛋白的生物学特性,利用PCR方法扩增粟酒裂殖酵母yAS56菌株SpTrz2的全长和N-末端一半的编码基因,通过NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点将SpTrz2的全长和N-末端一半编码基因定向插入pET-28a(+)原核表达载体中,并转化大肠埃希菌BL21(DE3);经过IPTG诱导表达后采用SDS-PAGE电泳切胶纯化法获得重组蛋白,以此为抗原免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,通过Western blotting检测抗体特异性。结果表明,SpTrz2是一个跨膜蛋白,含有3个跨膜结构域,具有多个B细胞抗原表位。SDS-PAGE电泳分析发现,粟酒裂殖酵母SpTrz2的全长和N-末端一半(SpTrz2和SpTrz2N)都以包涵体形式高效表达,其理论相对分子质量分别约为75.99 ku和44.77 ku。Western blotting检测显示,制备的兔抗SpTrz2和SpTrz2N多克隆抗体可以特异性识别天然的SpTrz2蛋白。本研究成功诱导表达、纯化重组蛋白SpTrz2和SpTrz2N,并制备了多克隆抗体,为SpTrz2蛋白的生物学功能相关研究奠定了基础。

• 单位
  长江大学; 生命科学学院; 南京师范大学