融合蛋白ABD-Fc-IL-2的真核表达及其生物学活性鉴定

作者：柴欣秀; 张波; 王静娜; 孔道春; 郭睿^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(04): 406-418.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003877

• 融合蛋白ABD-Fc-IL-2
• 基因重组
• 真核表达
• 生物学活性

目的 真核表达融合蛋白ABD-Fc-IL-2，并检测其生物学活性。方法 通过直接PCR及重叠延伸PCR法扩增目的基因SP-ABD-Fc-IL-2，连接至载体pcDNA3.1(+)，获得重组质粒pcDNA3.1/SP-ABD-Fc-IL-2。将重组质粒转染CHO-S细胞表达融合蛋白ABD-Fc-IL-2，并进行Protein A beads亲和层析纯化。Western blot法检测纯化融合蛋白的特异性，CTLL-2/MTT细胞增殖比色法测定其生物学活性，pull down/Western blot法检测融合蛋白中链球菌蛋白G的白蛋白结合结构域(albumin-binding domain,ABD)与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的相互作用。结果重组质粒pcDNA3.1/SP-ABD-Fc-IL-2经双酶切及测序鉴定，证明构建正确。纯化融合蛋白ABD-Fc-IL-2纯度达90%，可与鼠抗IL-2单克隆抗体发生特异性结合，生物学活性为3.29×108IU/mL，融合蛋白中ABD与HSA可相互结合。结论 真核表达的融合蛋白ABD-Fc-IL-2具有较高的生物学活性，可促进CTLL-2细胞增殖，且保持了ABD片段与HSA结合的能力。

• 单位
  山西医科大学; 北京大学; 生命科学学院; 蛋白质与植物基因研究国家重点实验室