构建含人脑源性神经营养因子基因的逆转录表达载体及其在成纤维细胞中的表达

作者：杨成; 鄢荣曾; 郭红延; 顾晓明

来源：中国修复重建外科杂志, 2009, 23(05): 588-591.

• 人脑源性神经营养因子
• 基因转染
• 成纤维细胞
• 逆转录病毒

目的构建含有人脑源性神经营养因子(human brain-derived neurotrophic factor,hBDNF)的逆转录病毒载体pLXSN(hBDNF-pLXSN),鉴定hBDNF生物活性。方法提取自愿捐献5月龄胎儿脑组织基因组mRNA,应用RT-PCR技术获得hBDNF基因序列,体外构建hBDNF-pLXSN感染的成纤维细胞NIH/3T3。对其进行病毒滴度检测,采用免疫组织化学染色鉴定NIH/3T3细胞中hBDNF的表达。通过对PC12细胞和大鼠背根神经节的培养,分析hBDNF生物学活性。结果测序结果表明成功构建了hBDNF-pLXSN。被感染的NIH/3T3细胞免疫组织化学染色显示胞浆中有hBDNF表达。hBDNF-pLXSN具有促进PC12细胞增殖的作用,并可以使培养的背根神经节长出神经突。结论hBDNF-pLXSN病毒可以感染NIH/3T3细胞并使其表达和分泌具有生物学活性的hBDNF,可以作为面瘫基因治疗研究的工具。

• 单位
  武警江西总队医院; 中国人民武装警察部队总医院