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摘要
目的构建融合了幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(Ure I)、尿素酶B亚单位(Ure B)的表位基因及霍乱毒素B亚单位(CTB)的原核表达质粒pET28a(+)/ct B/ure I-B(简称BIB)及其原核表达工程菌,并研究其生物学特性。方法参考基因库中ure I、ure B、ct B的基因序列,合成不含信号肽的ct B基因及ure I、ure B优势表位基因,串联融合,形成多靶点重组ct B/ure I-B基因(简称BIB基因),并构建pET28a(+)/BIB原核表达质粒,经限制性内切酶Nco I、Xho I酶切以及DNA测序鉴定正确后,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中,构建含BIB基因的原核表达工程菌。经乳糖诱导后,SDS-PAGE电泳检测重组蛋白(rBIB),Western blot及肌注BALB/c小鼠实验检测rBIB的免疫反应性和免疫原型。结果构建的原核表达质粒pET28a(+)/BIB,经双酶切和测序分析显示,构建的BIB基因与设计序列100%一致。乳糖诱导后,SDS-PAGE电泳显示在33kD左右出现一条明显蛋白条带,Western blot检测在33kD左右出现特异反应条带,肌注免疫BALB/c小鼠产生了较高的抗体水平。结论成功构建了pET28a(+)/BIB原核表达质粒及BIB原核表达工程菌,该工程菌可表达重组蛋白rBIB,且该重组蛋白具有良好的免疫反应性及免疫原性。
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