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摘要
目的：研究微RNA(microRNA,miR)-153-5p对胰腺导管腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并探讨其相关的作用机制。方法：采用实时荧光定量PCR法检测miR-153-5p在9例胰腺导管腺癌及相应的癌旁组织中的表达水平，以及其在胰腺正常导管上皮细胞HPDE和胰腺癌各个细胞系PANC-1、MIAPaCa-2、SW1990及BxPC-3中的表达水平，从中筛出PANC-1和SW1990细胞用于后续实验。采用脂质体法将miR-153-5p-模拟物（mimics）转入PANC-1及SW1990细胞使miR-153-5p过表达，以转入阴性对照（negative control,NC）-mimics作为阴性对照组。采用CCK-8法及Transwell小室实验检测miR-153-5p过表达对PANC-1及SW1990细胞增殖、迁移和侵袭的影响。通过Targetscan等多种在线预测软件及生物信息学分析miR-153-5p可能的靶基因，并采用实时荧光定量PCR法检测腺导管腺癌及相应的癌旁组织中卷曲蛋白家族受体3(Frizzled3,FZD3)mRNA的表达水平。采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测miR-153-5p过表达对FZD3 mRNA和蛋白表达水平的影响，并进一步利用双荧光素酶报告实验验证FZD3基因是否为miR-153-5p的靶基因。通过脂质体法将miR-153-5p-mimics以及携带有FZD3全基因的重组质粒共转入PANC-1和SW1990细胞，再用实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测FZD3 mRNA及蛋白的表达水平，并通过CCK-8法以及Transwell小室实验检测miR-153-5p和FZD3表达水平的变化对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果：相较于正常胰腺组织或细胞，miR-153-5p在胰腺癌组织及各个细胞中的表达量明显更低（P均<0.05）。CCK-8和平板克隆实验显示，过表达miR-153-5p后对PANC-1和SW1990细胞的增殖能力被明显抑制（P均<0.05）；划痕愈合实验结果显示，miR-153-5p过表达能够有效地延缓划痕伤口的愈合，抑制胰腺癌细胞的横向迁移能力（P均<0.05）;Transwell小室实验提示，miR-153-5p过表达能明显抑制胰腺癌细胞侵袭和纵向迁移能力（P均<0.05）。利用在线预测软件及生物信息学分析得到FZD3基因可能是miR-153-5p的下游靶点；相较于正常胰腺组织，FZD3 mRNA在胰腺癌组织中的表达量明显升高（P<0.01）,FZD3 mRNA与miR-153-5p的表达呈负相关（r=-0.5515,P=0.0219）。与阴性对照组相比，过表达miR-153-5p后PANC-1和SW1990细胞中FZD3 mRNA和蛋白的表达量明显减少（P均<0.05）。双荧光素酶报告实验显示，miR-153-5p与FZD3 mRNA的3’-非翻译区（untranslated region,UTR）结合，下调FZD3蛋白的表达水平。当共转染miR-153-5p-mimics及携带有全基因的FZD3重组质粒后，过表达FZD3能够减弱miR-153-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用（P均<0.05）。结论：miR-153-5p通过靶向FZD3基因抑制胰腺癌的侵袭和迁移，提示miR-153-5p可能是胰腺癌治疗中一种潜在生物标志物。
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单位贵州医科大学; 武汉大学人民医院
