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摘要
青鳉是研究基因功能、器官发生和发育机制的模式生物之一，基因编辑技术已在青鳉中得到广泛应用，但利用CRISPR/Cas9技术构建青鳉突变体的详细过程还未见报道。为了完整详细地阐明青鳉突变体的构建过程，实验以青鳉Olpax6.1基因的敲除为例，首先利用ChopChop网站设计获得Olpax6.1基因gRNA的靶点；其次通过PCR扩增和质粒酶切分别获得gRNA和Cas9 mRNA体外转录的模板，并通过体外转录合成gRNA和Cas9 mRNA；再将Cas9 mRNA和gRNA混合进行青鳉胚胎显微注射获得突变F0；最后利用PCR、T7EndonucleaseⅠ酶切和Sanger测序筛选F0与野生型杂交的子代获得相同突变类型的F1，进而将相同突变的F1进行杂交并筛选其子代，获得青鳉Olpax6.1敲除的纯合突变体，纯合突变体表现出眼部发育畸形的经典表型。本研究为青鳉突变体的构建提供详细完整的实验方案，同时也为其他鱼类突变体的构建提供技术参考。
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