叶酸/聚酰胺-胺介导miR-7治疗小鼠胶质瘤

作者：刘晓智; 苏治国; 姜忠敏; 李罡; 宋军; 黄凯; 王亮; 陈镭; 刘振林

来源：中华肿瘤杂志, 2012, 34(5): 325-330.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-3766.2012.05.002

• 胶质瘤
• 微小RNA
• 表皮生长因子受体
• 基因治疗
• 小鼠
• 叶酸/聚酰胺-胺络合物

目的 探讨叶酸/聚酰胺-胺(FA/PAMAM)介导的微小RNA-7(miR-7)基因治疗体内胶质瘤的实际效果.方法 以络合物FA/PAMAM为基因载体转染miR-7至人脑胶质瘤细胞系U251,荧光下观察转染效率,逆转录定量PCR (qRT-PCR)检测miR-7水平.制备去胸腺小鼠颅内U251胶质瘤模型,于成瘤后第3天在肿瘤原位实施络合物移植,MRI动态观察荷瘤小鼠颅内肿瘤体积及水肿变化,记录小鼠生存期.荷瘤小鼠瘤组织切片行原位凋亡检测,免疫组织化学法检测细胞增殖活性抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9的表达,Western blot法检测表皮生长因子受体(EGFR)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2( AKT-2)的蛋白表达量.结果 与脂质体转染比较,FA/PAMAM对miR-7具有更高的基因转染效率.MRI显示,FA/PAMAM/miR-7组的肿瘤体积增长速度明显低于脂质体/miR-7组,小鼠生存期延长.对照组的细胞凋亡率为(5.3±0.9)％,脂质体/miR-7组的细胞凋亡率为(11.4±2.4)％,FA/PAMAM/miR-7组的细胞凋亡率为(17.7±3.7)％,FA/PAMAM/miR-7组的细胞凋亡率明显增加.免疫组化结果显示,PCNA、MMP-2和MMP-9在对照组中的阳性率分别为(57.3±7.4)％、(45.4±6.9)％和(55.1±7.3)％,在脂质体/miR-7组中分别为(49.3±5.9)％、(31.7±7.1)％和(39.4±6.4)％,在FA/PAMAM/miR-7组中分别为(34.6±5.4)％、(24.5±4.1)％和(25.4±5.1)％.EGFR和AKT-2蛋白在对照组中的相对表达强度分别为1.09 +0.12和0.62±0.10,在脂质体/miR-7组中分别为0.63±0.11和0.43±0.07,在FA/PAMAM/miR-7组中分别为0.47±0.09和0.31±0.04.FA/PAMAM/miR-7组中PCNA、MMP-2、MMP-9、EGFR和AKT-2蛋白的表达水平均有不同程度下降(均P＜0.05).结论 FA/PAMAM具有较脂质体更高的基因转染效率,药物作用时间更为持久,对胶质瘤的生长有一定的抑制作用,有望成为一种新的胶质瘤基因治疗方法.

• 单位
  天津市第五中心医院; 神经内科