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摘要
目的通过网络数据挖掘miR-613抑制肾透明细胞癌增值及侵袭的作用机制。方法从StarBase、GeneCards数据库筛选肾透明细胞癌和miR-613共同靶点基因;应用TCGA数据库数据分析筛选出在肾透明细胞癌组织样本和正常组织样本中的差异高表达并影响预后的共同靶点基因;利用STRING平台构建miR-613-肾癌靶点交互网络;利用R软件对核心靶点蛋白进行GO生物过程分析及KEGG通路富集分析;RT-PCR检测786O、ACHN及慢病毒载体构建的786O-miR-NC、ACHN-miR-NC、786O-miR-613、ACHN-miR-613细胞中miR-613相对表达量;Western blot检测上述细胞中AKT、p-AKT蛋白的表达。结果 StarBase网站及GeneCards数据库筛选出miR-613和肾癌共同靶点1 315个;TCGA数据库数据分析筛选出71个上调差异基因可能影响患者的总体生存期;筛选出miR-613抑制肾透明细胞癌生物学行为的核心靶标蛋白,主要涉及表皮生长因子受体、CCND1、CDC25C、ETS1等。GO生物过程分析确定377个条目,主要包括血管生成调控、细胞外结构组织、细胞外基质的组织调控、血管生成正调控、细胞周期过程正调控等生物活性过程;KEGG富集分析只得到PI3K-AKT信号通路;RT-PCR结果显示786O-miR-613组miR-613表达量较786O-miR-NC组及786O组明显升高,ACHN-miR-613组miR-613表达量较ACHN-miRNC组及ACHN组明显升高,且差异均有统计学意义(P<0.001);Western blot结果提示miR-613过表达可抑制PI3K-AKT信号通路关键蛋白p-AKT的蛋白的表达。结论 miR-613通过PI3K-AKT信号通路多生物途径共同起作用,抑制肾透明细胞癌的增殖、侵袭。
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