烟草烟雾提取物通过ROS/NLRP3炎性小体信号通路介导人子宫内膜上皮细胞焦亡

作者：黄渝婷; 王应雄^*

来源：毒理学杂志, 2023, 37(05): 375-382.

DOI：10.16421/j.cnki.1002-3127.2023.05.002

• 烟草烟雾提取物
• 人子宫内膜上皮
• 活性氧
• NLRP3
• 焦亡

目的 探讨烟草烟雾提取物(cigarette smoke extract, CSE)诱发人子宫内膜上皮细胞(HEEC)焦亡的机制。方法 将永生化HEEC细胞，与不同浓度的(0%、0.5%、1.0%和2.0%) CSE共培养24 h。使用荧光探针(DCFH-DA)试剂盒检测细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)的含量；CCK-8试剂盒检测细胞活性及Western blot检测NOD-like receptor protein 3 (NLRP3); Apoptosis-associated speck-like protein with CARD domain(ASC)、Caspase-1、Gasdermin D (GSDMD)和interleukin (IL)-1β蛋白表达。随后，分别给予ROS清除剂(Tempol)与NLRP3选择性抑制剂(MCC950)对CSE暴露的HEEC细胞进行干预，检测细胞内ROS的含量；观察细胞的形态变化，检测NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD和IL-1β蛋白表达情况。结果 与对照组相比，CSE促进HEEC细胞内ROS的蓄积(F=298.60;P<0.001),抑制细胞活性(F=295.80;P<0.01;P<0.001),诱导NLRP3蛋白表达(F=191.70;P<0.001),差异有统计学意义。此外，CSE破坏HEEC细胞膜完整性，导致细胞膜形成肿胀的囊泡(即焦亡小体);而超氧化物歧化酶(SOD)类似物Tempol能改善CSE导致的ROS蓄积(F=1 029.00;P<0.001)以及抑制CSE诱导的HEEC细胞焦亡小体的形成和NLRP3炎性小体相关蛋白NLRP3 (F=135.00;P<0.01); ASC(F=563.40;P<0.01); Caspase-1(F=88.09;P<0.01); GSDMD(F=48.21;P<0.01);IL-1β(F=74.43;P<0.01)的表达，差异有统计学意义；然而使用MCC950抑制NLRP3的活性(F=174.70;P<0.05),能够改善CSE诱导的HEEC细胞焦亡小体的形成，但并不能改变CSE对细胞内ROS蓄积的影响，差异无统计学意义(F=863.00;P>0.05)。结论 CSE通过促进ROS蓄积，激活NLRP3炎性小体信号通路来介导HEEC细胞发生焦亡。

• 单位
  重庆医科大学