爱玉ISSR反应体系的建立与优化

作者：史辉; 黄其梅; 叶美娜; 阮少江; 陈勇

来源：吉首大学学报(自然科学版), 2014, 35(02): 73-78.

• 爱玉
• ISSR
• 反应体系
• 正交设计

通过单因子试验和正交设计,对影响爱玉ISSR-PCR扩增效果的因素,如模板DNA用量、Taq酶用量、dNTPs浓度、引物浓度、延伸时间和循环次数等指标进行优化.实验确立了可用于爱玉ISSR-PCR分析最适宜的反应体系:20μL反应体积中含1ng模板DNA、1.0U Taq酶、0.4μmol/L引物和0.18mmol/L dNTPs;PCR扩增程序为94℃预变性4min;94℃变性45s,53℃退火45s,72℃延伸2.5min,共35个循环;72℃延伸7min,4℃保存.应用该体系对14份爱玉种质进行扩增,证实了该体系的适用性和稳定性.

• 单位
  宁德师范学院