BDNF过表达的人脐带间充质干细胞源性多巴胺能样神经元的构建和鉴定

作者：蒋芝; 徐君; 冯美江^*

来源：实用老年医学, 2020, 34(06): 538-542.

DOI：10.3969/j.issn.1003-9198.2020.06.006

• 脑源性神经营养因子
• 人脐带间充质干细胞
• 多巴胺能样神经元

目的体外构建脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)过表达的人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs)源性多巴胺能样神经元并鉴定。方法将P3代HUC-MSCs诱导分化为多巴胺能样神经元,采用免疫荧光检测其NeuN与β-tubulinⅢ的表达。构建BDNF过表达载体、空载体或BDNF siRNA并分别转染至诱导后的多巴胺能样神经元,细胞分为5组:HUC-MSCs组、多巴胺能样神经元组、多巴胺能样神经元+空载体组、多巴胺能样神经元+BDNF载体组和多巴胺能样神经元+BDNF siRNA组。应用免疫荧光检测各组细胞中Nurr1和酪氨酸羟化酶(TH)共表达情况。结果 HUC-MSCs诱导分化后,NeuN较诱导前明显增加(P <0. 01),β-tubulinⅢ表达及Nurr1和TH共表达也较诱导前显著增加(P <0. 001)。转染后,多巴胺能样神经元+BDNF载体组的Nurr1和TH共表达高于HUC-MSCs组和多巴胺能样神经元+BDNFsiRNA组(P<0.001),同时高于多巴胺能样神经元组及多巴胺能样神经元+空载体组(P <0. 01)。结论 HUC-MSCs在体外可诱导分化为多巴胺能样神经元,BDNF过表达能促进HUC-MSCs源性多巴胺能样神经元的分化和成熟。

• 单位
  南京医科大学第二附属医院