单核增生李斯特菌Internalin A的克隆表达与抗体制备

作者：彭珍; 魏华; 万翠香; 熊勇华; 赖卫华; 徐锋

来源：中国微生态学杂志, 2009, 21(12): 1073-1076.

DOI：10.13381/j.cnki.cjm.2009.12.002

• 单核增生李斯特菌
• InlA
• 纯化
• 抗血清
• 特异性

目的克隆表达单核增生李斯特菌Internalin A(InlA),并以之为抗原制备检测单核增生李斯特菌的抗体。方法通过PCR技术从单核细胞增生李斯特菌4b中扩增出inlA基因,克隆筛选和测序鉴定后,最终构建该基因的原核表达质粒pGEX-4T-InlA,谷胱甘肽树脂亲和层析纯化表达产物后,免疫小鼠分别制备相应的多抗和单抗。结果在大肠埃希菌中成功表达了InlA,并对其进行了纯化,融合表达产物分子量约为110 kD;免疫小鼠获得的抗血清效价达到1∶1600;得到了3株抗InlA的单克隆抗体杂交瘤细胞株,腹水单抗效价为1∶1×1051∶3×105。2种抗体与其他病原菌均无交叉反应。结论通过表达单核增生李斯特菌的特异性蛋白制备的抗体,能有效地消除交叉反应,提高检测的特异性。

• 单位
  南昌大学食品科学与技术国家重点实验室