钙调蛋白2调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的研究

作者：王坤雷; 谭剀; 刘颖懿; 杨智勇; 袁玉峰^*

来源：中华实验外科杂志, 2023, 40(03).

• 胰腺癌
• 钙调蛋白2
• 增殖
• 迁移
• 侵袭

目的探讨钙调蛋白2(CALM2)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法通过基于基因表达水平值的交互式分析平台(GEPIA2.0)对癌症基因组图谱(TCGA)和基因型组织表达(GTEx)数据库中的179例胰腺癌和171例癌旁组织中CALM2基因的表达使用方差分析(ANOVA)进行差异分析, 对89例高表达CALM2的胰腺癌患者和89例低表达CALM2的胰腺癌患者分别绘制Kaplan-Meier曲线, 使用log-rank检验进行预后分析。采用短发夹RNA(shRNA)慢病毒感染人源胰腺癌细胞系SW1990和ASPC1, 建立对照组和CALM2敲低组细胞系;采用慢病毒包被质粒感染人源胰腺癌细胞系BxPC-3, 建立对照组和CALM2过表达组细胞系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测敲低或过表达CALM2后细胞内CALM2的mRNA和蛋白表达水平。采用克隆形成和皮下注射裸鼠荷瘤实验验证敲低或过表达CALM2对胰腺癌细胞增殖能力的影响, 采用划痕愈合实验和Transwell实验验证敲低或过表达CALM2对胰腺癌细胞的迁移、侵袭能力的影响。结果 CALM2在胰腺癌中的表达水平高于癌旁组织(P<0.05), 预后分析显示高表达CALM2与胰腺癌预后不良呈正相关[总体生存期:风险比(HR)=1.9, P<0.05;无病生存期:HR=1.8, P<0.05)]。低表达CALM2的SW1990和ASPC1组细胞的集落形成数量明显低于对照组(SW1990:185.30±20.13比728.30±24.58, t=29.60, P<0.05;ASPC1:168.70±13.01比551.30±35.35, t=17.60, P<0.05), 小鼠皮下荷瘤结果表明CALM2敲低组的肿瘤质量明显低于对照组[SW1990:(0.635±0.085) g比(0.343±0.053) g, t=5.83, P<0.05;ASPC1:(0.845±0.083) g比(0.329±0.030) g, t=11.76, P<0.05], CALM2敲低组的平均划痕距离显著低于对照组[SW1990:(43.67±4.04)%比(68.67±4.73)%, t=6.96, P<0.05;ASPC1:(41.67±3.51)%比(70.33±1.53)%, t=12.96, P<0.05], CALM2敲低组的迁移细胞数明显低于对照组(SW1990:206.30±27.15比480.00±23.64, t=13.17, P<0.05;ASPC1:155.70±18.56比326.00±13.45, t=12.87, P<0.05)。过表达CALM2的BxPC3组细胞形成的集落数量明显高于空转质粒组(209.30±26.63比117.70±12.74, t=5.38, P<0.05), 小鼠皮下荷瘤结果显示CALM2过表达组的肿瘤质量明显高于空转质粒组[(0.478±0.044) g比(1.354±0.209) g, t=8.22, P<0.05], CALM2过表达组的平均划痕距离显著高于空转质粒组[(64.67±3.06)%比(51.67±3.51)%, t=4.84, P<0.05]、CALM2过表达组的迁移细胞数明显高于空转质粒组(887.00±73.55比430.00±23.64, t=10.42, P<0.05)。结论 CALM2能促进胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力, 并与胰腺癌的预后明显相关。

• 单位
  武汉大学中南医院