体外诱导获取利福平耐药结核分枝杆菌菌株及其稳定性研究

作者：司晓燕; 陈俊林^*; 施慧慧; 瞿梅; 马娟; 顾德林

来源：交通医学, 2022, 36(01): 10-18.

DOI：10.19767/j.cnki.32-1412.2022.01.003

• 结核分枝杆菌
• 利福平
• 体外诱导
• 耐药机制
• 外排泵基因
• rpoB基因

目的：利用浓度倍增方法体外诱导对利福平（rifampicin,Rfp）耐药的结核分枝杆菌（mycobacteriurn tuberculosis,MTB）菌株，研究耐药机制演变过程及遗传稳定性。方法：将MTB标准菌株H37Rv在Rfp浓度2倍递增的7HIO液体培养基中进行传代培养，逐步诱导MTB菌株对Rfp耐药。利用Xpert MTB/RIF及荧光PCR熔解曲线法检测不同浓度Rfp诱导菌株rpoB基因的突变情况，实时荧光定量PCR方法检测外排泵基因Rv1457c、Rv1458c mRNA表达量，测算与标准菌株Rv1457c、Rv1458c相对表达量比值，将Rfp耐药菌株在无药罗氏培养基上连续培养10代，观察耐药性的变化。结果：MTB标准菌株诱导到Rfp 32μg/mL，获得rpoB基因突变菌株；Rv1457c和Rv1458c基因表达量随Rfp诱导浓度递增而逐渐上升，当浓度达到0.5μg/mL及以上时，与标准菌株的比值超过2，提示诱导菌株Rv1457c和Rv1458c基因已处于高表达状态。在无药培养基上连续传代10代后，rpoB基因发生突变前各浓度Rfp诱导菌株MIC明显降低，而rpoB基因突变菌株MIC值基本稳定。结论：通过体外诱导实验可以获得Rfp耐药MTB菌株，药物外排泵基因表达与MTB菌株诱导浓度有关，rpoB基因突变后的MTB菌株对Rfp耐药性能获得稳定遗传。