蛋白磷酸酶4在棕榈酸降低人脐静脉内皮细胞eNOS Ser633位点磷酸化中的作用

作者：秦思; 张倩; 王敬杰; 于敏; 骆妍蓓; 丁菁; 陆德琴^*

来源：中国病理生理杂志, 2020, 36(05): 803-809.

DOI：10.3969/j.issn.1000-4718.2020.05.005

• 棕榈酸
• 蛋白磷酸酶4
• 内皮型一氧化氮合酶
• 磷酸化
• 蛋白磷酸酶2A

目的:探讨蛋白磷酸酶4(protein phosphatase 4,PP4)在棕榈酸(palmitic acid,PA)引起内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)Ser633位点磷酸化水平降低中的调控作用。方法:选用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)为研究对象,分别用终浓度为25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L的PA处理HUVECs 36 h,另用100μmol/L PA处理HUVECs 12 h、24 h、36 h和48 h,用蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)家族抑制剂福司曲星(fostriecin,FST)20 nmol/L或冈田酸(okadaic acid,OA)5 nmol/L分别预处理细胞30 min,然后用蛋白磷酸酶4催化亚基(protein phosphatase 4 catalytic subunit,PP4c)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和蛋白磷酸酶2A催化亚基(protein phosphatase 2A catalytic subunit,PP2Ac)siRNA分别转染HUVECs。用Western blot法检测eNOS总蛋白、PP4c和PP2Ac蛋白表达水平及eNOS Ser633磷酸化水平,用DAF-FM DA荧光探针检测细胞内一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量。结果:(1)与control组比较,PA(终浓度25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L)处理HUVECs 36 h后,eNOS Ser633磷酸化水平均显著降低(P<0.05),100μmol/L PA处理HUVECs 24 h、36 h和48 h后eNOS Ser633磷酸化水平均显著降低(P<0.05);各组间eNOS总蛋白表达无显著差异。(2)与control组相比,FST和OA预处理均可逆转PA处理引起的eNOS Ser633磷酸化水平降低(P<0.05)和细胞内NO产量减少(P<0.05);各组间eNOS总蛋白表达无显著差异。(3)与siControl组相比,si-PP4c转染组PP4c蛋白表达水平显著降低(P<0.05),同时eNOS Ser633磷酸化水平显著增高(P<0.05);si-PP2Ac转染组PP2Ac蛋白表达水平显著降低(P<0.05),但eNOS Ser633磷酸化水平表达无显著差异;各组间eNOS总蛋白表达无显著差异。结论:PA可显著降低HUVECs中eNOS Ser633磷酸化水平及NO产量,其机制可能是由于PA诱导PP2A家族中的PP4而不是PP2A激活所致。

• 单位
  贵州医科大学