HBV全基因组逆转录病毒载体的构建及鉴定

作者：项凤梅; 卢建溪; 顾琳; 陈伟; 王强; 李莉; 李永伟; 刘旭东; 李刚

来源：热带医学杂志, 2008, (01): 9-11.

DOI：10.3969/j.issn.1672-3619.2008.01.004

• HBV
• 逆转录病毒载体
• 全基因组 hepatitis virus B
• retroviral vector
• whole genome

目的构建HBV全基因组逆转录病毒载体,并进行酶切鉴定和测序。方法用合适的引物,通过PCR方法扩增pBlue Script sk(-)-HBV载体上的HBV全基因组,分别用HindⅢ和SalⅠ进行PCR产物和pLEGFP-N1载体的双酶切,用连接酶将HBV DNA和载体进行连接,转化连接产物后,进行质粒提取、酶切和测序鉴定。结果PCR产物凝胶电泳可见3.2 kb条带。pLEGFP-N1-HBV重组质粒酶切结果电泳后,可看见6.9 kb和3.2 kb的条带,测序结果表明重组质粒含有HBV全基因组。结论成功构建了HBV全基因组逆转录病毒载体,为下一步形成稳定的细胞模型奠定基础。

• 单位
  中心实验室; 中山大学; 中山大学附属第三医院