获得重构基因的简捷方法——重叠延伸PCR

作者：刘玲丽; 谭岩; 刘力华; 张琨; 时阳; 许淑芬; 方艳秋; 段秀梅; 姜艳芳; 王晓祺

来源：吉林大学学报(医学版), 2004, (05): 713-716.

DOI：10.13481/j.1671-587x.2004.05.022

• 嵌合白细胞介素18
• 重叠延伸PCR
• 非对称PCR

目的 :构建 IFN- β信号肽序列与白细胞介素 18(IL- 18)成熟肽的重组嵌合分子。方法 :从 BAL B/ c鼠基因组 DNA扩增 IFN- β信号肽序列 ;由小鼠 Pro- IL- 18真核表达质粒获得 IL- 18成熟肽序列 ;以非对称 PCR技术得到IFN- β信号肽编码区的反义链和 IL- 18成熟肽正链 ;采用重叠延伸 PCR(SOE- PCR)产生具有 IFN- β信号肽与 IL- 18成熟肽的嵌合编码序列 ;定向连方式构建嵌合 IL- 18的表达质粒并测序。结果 :连续胶 PAGE表明非对称 PCR可分别扩增出两个靶序列的特异性单链 ,大小符合预期。IFN- β信号肽对称 PCR产物与 IL- 18非对称 PCR产物混合作为模板 ,进行重叠延伸 ;电泳分析可见清晰的嵌合片段 ;测序显示重组质粒的表达框由两个设计的靶序列构成 ,且无移码。结论 :重叠延伸 PCR是一种获得重构基因的简捷方法。

• 单位
  吉林大学第一医院; 吉林省疾病预防控制中心