Smad泛素化调节因子2siRNA的筛选及转染原代肾小管上皮细胞条件的优化

作者：赵海焦; 高磊; 陆彦; 田娅慧; 贾志华; 田海燕; 吴国娟; 张中文

来源：中国畜牧兽医, 2014, 41(01): 19-24.

• Smad泛素化调节因子2
• 转染
• siRNA
• 肾小管上皮细胞
• 优化

试验旨在优化Smad泛素化调节因子2(Smurf2)siRNA最佳转染条件,筛选最佳siRNA干扰片段,进而实现对Smurf2基因的瞬时沉默,为研究Smurf2基因在马兜铃酸肾病(aristolochic acid nephrohathy,AAN)中的作用奠定基础。本研究通过培养小鼠原代肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs),并以脂质体LipofectamineTM2000为转染介质,将Smurf2siRNA转染入RTECs;通过观察绿色荧光的表达量及Real-time PCR反应优化转染条件,转染后Real-time PCR检测mRNA表达抑制率。CCK-8法检测Smurf2siRNA复合物对RTECs活性的影响;同时,用Real-time PCR和Western blotting检测不同位点Smurf2siRNA对Smurf2表达的影响。结果显示,当LipofectamineTM2000与siRNA比例为1.5μL∶30pmol时,转染效率最高,为70%80%;Smurf2-619siRNA干扰效果最明显;与正常组相比,转染siRNA组的Smurf2蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。最终确定了Smurf2siRNA最佳转染条件,其中Smurf2-619siRNA对Smurf2表达的抑制率

• 单位
  北京观赏动物医院; 北京农学院