稳定表达EGFR胞外区的NIH3T3细胞株的建立及鉴定

作者：江秀玲; 胡有根; 石必枝

来源：现代医药卫生, 2013, (03): 327-328+330.

• 表皮生长因子
• NIH3T3细胞
• 基因表达
• 表皮生长因子受体胞外区 Epidermal growth factor
• NIH 3T3 cells
• Gene expression
• Epidermal growth factor receptor extracellular domain

目的构建稳定表达表皮生长因子受体(EGFR)胞外区(EGFRex)的NIH3T3细胞株。方法构建带有EGFRex基因的重组真核表达质粒PLNCX2-EGFRex,经脂质体法转染NIH3T3细胞后,用G418筛选阳性克隆,用免疫组化和蛋白质印迹(Western blot)检测EGFRex蛋白的表达,用EGF-EGFP蛋白检测其活性。结果成功构建了真核表达载体PLNCX2-EGFRex。以其转染NIH3T3细胞后,经免疫组化和Western blot检测到EGFRex的表达。在荧光显微镜下见细胞膜上有绿色荧光。结论人EGFRex在NIH3T3细胞内以其天然活性形式稳定表达,为抗体制备奠定了基础。

• 单位
  扬州职业大学; 武警江苏总队医院; 癌基因与相关基因国家重点实验室; 上海市肿瘤研究所