miR-34a-5p靶向BCAN对胶质瘤细胞增殖、迁移的影响

作者：李华晓; 麦浩坚; 宋同均; 王士强; 黎志迪; 陈小凤

来源：临床神经外科杂志, 2022, 19(02): 148-155.

• 胶质瘤
• 短蛋白聚糖
• MicroRNA-34a-5p
• 增殖
• 迁移
• 侵袭

目的 探究MicroRNA-34a-5p(miR-34a-5p)过表达对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其与短蛋白聚糖(BCAN)的靶向关系。方法 收集36例脑胶质瘤患者的脑胶质瘤组织和因脑外伤行内减压术的36例患者的正常脑组织。体外培养人胶质瘤细胞U373、U251 MG、LN229、A172和人正常星形胶质细胞NHA，逆转录定量PCR(RT-qPCR)检测组织/细胞中miR-34a-5p、BCAN mRNA表达水平。取对数生长期的U251 MG细胞，分为对照组(NC组)、mimic-NC组(转染miR-34a-5p mimic阴性对照)、miR-34a-5p过表达组(转染miR-34a-5p mimic)、miR-34a-5p过表达+pc DNA3.1-NC组(miR-34a-5p mimic和pc DNA3.1-BCAN阴性对照空载体质粒共转染)、miR-34a-5p过表达+pc DNA3.1-BCAN组(miR-383-5p mimic和pc DNA3.1-BCAN共转染)。转染48 h后，收集各组细胞用RT-qPCR检测转染效率。MTT法检测细胞增殖活性;划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力; Western Blot检测细胞中BCAN、G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测进一步验证miR-34a-5p与BCAN的靶向关系。结果 胶质瘤组织中BCAN mRNA表达水平显著高于正常组织，而miR-34a-5p的表达水平显著低于正常组织，差异有统计学意义(均P <0.05);与人正常星形胶质细胞NHA相比，BCAN在人胶质瘤细胞中的表达显著升高(P <0.05)，而miR-34a-5p呈低表达(P <0.05)。转染后，与NC组相比，miR-34a-5p过表达组细胞中miR-34a-5p水平显著升高(P <0.05),BCAN mRNA和蛋白水平、细胞增殖率、划痕愈合率、穿膜细胞数以及Cyclin D1、PCNA、MMP-2、MMP-9的表达均显著降低(均P <0.05);在过表达miR-34a-5p的基础上，上调BCAN的表达可显著减弱miR-34a-5p过表达对U251 MG细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(均P <0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果显示，miR-34a-5p的高表达可显著抑制BCAN-WT的荧光素酶活性(P <0.05)。结论 miR-34a-5p是BCAN的上游调控因子，过表达miR-34a-5p可靶向下调BCAN的表达，进而抑制胶质瘤细胞的增殖和迁移侵袭。