盖塔病毒TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作者：朱翔宇; 鲁荣光; 胡博; 蔡熙姮; 刘昊; 史宁^*

来源：中国兽医学报, 2020, 40(07): 1290-1295.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.07.05

• GETV
• TaqMan探针
• 荧光定量RT-PCR

为了建立特异、灵敏、快速的荧光定量RT-PCR方法用于检测盖塔病毒(Getah virus,GETV)的核酸,并初步应用于GETV的临床标本检测。根据GenBank登录的GETV全基因组序列,应用生物学软件进行序列比对,在NSP1保守区设计1对特异性引物和TaqMan探针。建立实时荧光定量RT-PCR检测GETV的方法,并对建立的方法进行敏感性、特异性测定和临床样品检验。结果显示,该方法能特异性地鉴别检测GETV;检测灵敏度高,检测的最低模板量可以达到2.03×101 copies/μL;将收集到的10 000只蚊子样品分成100份进行检测,共检测出8份GETV阳性样品,与常规反转录PCR(RT-PCR)检测及病毒分离结果吻合。本研究建立的GETV TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法特异、灵敏,适用于GETV的临床早期诊断。

• 单位
  佛山科学技术学院; 中国农业科学院特产研究所