基于β-内酰胺酶构建大肠杆菌体内Aβ42聚集抑制剂筛选体系

作者：赵文平; 贾龙刚; 路福平; 刘夫锋^*

来源：食品与发酵工业, 2019, 45(19): 17-24.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.020989

• 阿尔茨海默病
• 淀粉样β蛋白42 (Aβ42)
• TEM1-β-内酰胺酶(βlac)
• 融合蛋白表达
• 聚集抑制剂
• 大肠杆菌体内筛选系统

淀粉样β蛋白(Aβ)的错误折叠和聚集是导致阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的主要原因,开发Aβ聚集抑制剂对于缓解和治疗AD至关重要。根据TEM1-β-内酰胺酶(TEM1-β-lactamase,βlac)的结构特征及Aβ42的聚集特性,利用分子生物学方法将Aβ42插入到βlac 196-197氨基酸残基之间,构建了BL21-βlacAβ42重组菌株。利用已知Aβ42聚集抑制剂,分别通过斑点滴定实验、平板涂布实验和菌体浓度变化检测实验进行了验证。结果显示,添加已知Aβ42抑制剂后,BL21-βlac-Aβ42菌株在特定氨苄青霉素(ampicillin,Amp)浓度条件下生长状况得到改善,允许微生物细胞生长的最大细胞稀释倍数增大,证明该融合体系能应用于大肠杆菌体内筛选Aβ42聚集抑制剂。该研究实现了淀粉样蛋白聚集抑制剂在微生物体内的高通量筛选,为开发新型抗Aβ聚集药物奠定了基础。

• 单位
  天津科技大学; 工业酶国家工程实验室; 工业发酵微生物教育部重点实验室; 生物工程学院