三碘甲状腺原氨酸激活Nrf2信号通路减轻H2O2诱导的HaCaT细胞损伤

作者：吴俊丽; 刘芳; 毛志蓉; 高小青; 杜杰^*

来源：医学研究生学报, 2021, 34(11): 1132-1137.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2021.11.003

• 三碘甲状腺原氨酸
• Nrf2信号通路
• H2O2
• 氧化应激
• 伤口愈合

目的 三碘甲状腺原氨酸(T3)具有促进皮肤伤口愈合的能力,但其作用机制需要深入探讨。文中旨在探讨T3对H2O2诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT)氧化应激损伤的保护作用,及其与核转录因子类红细胞-2因子(Nrf2)信号通路的关系。方法 取对数生长期HaCaT细胞,采用500μmol/L H2O2处理HaCaT细胞2 h以诱导氧化损伤,同时加入不同浓度的T3(1、0.5、0.1 nmol/L)和(或) Nrf2抑制剂ML385干预,将细胞分为9组:正常组(未进行任何干预)、H2O2组(仅用H2O2造模)、ML385组(在用H2O2诱导细胞前,先用含20μmol/L ML385处理细胞2 h)、1 nmol/L T3组(H2O2诱导2 h后,在含1nmol/L T3培养液内培养24 h)、0.5nmol/L T3组(H2O2诱导2 h后,在含0.5 nmol/L T3培养液内培养24 h)、0.1 nmol/L T3组(H2O2诱导2 h后,在含0.1 nmol/L T3培养液内培养)、ML385+1 nmol/L T3组(20μmol/L ML385诱导+1 nmol/L T3)、ML385+0.5nmol/L T3组(20μmol/L ML385诱导+0.5 nmol/L T3)、ML385+0.1 nmol/L T3组(20μmol/L ML385诱导+0.1 nmol/L T3)。应用MTT法和划痕实验分别检测细胞活性和面积修复率; ELISA法和比色法检测细胞上清中氧化应激相关指标(MDA、ROS、GSH、CAT和SOD)和炎症相关因子(IL-6和TNF-α)的含量; Western blot检测细胞内Nrf2和HO-1蛋白表达。结果 1 nmol/L T3组、0.5 nmol/L T3组和0.1 nmol/L T3组的细胞活性明显高于H2O2组(P<0.05)。ML385+1 nmol/L T3组细胞活性较1nmol/L T3组明显降低(P<0.05),ML385+0.5 nmol/L T3组细胞活性较0.5nmol/L T3组明显降低(P<0.05),ML385+0.1 nmol/L T3组细胞活性较0.1 nmol/L T3组明显降低(P<0.05)。细胞划痕实验所示,培养20 h,H2O2组和ML385组的面积修复率[(28.99±3.86)%、(26.27±2.00)%]显著低于正常组[(89.67±12.88)%],差异有统计学意义(P<0.05); 1 nmol/L T3组、0.5 nmol/L T3组和0.1nmol/L T3组面积修复率较H2O2组明显增高(P<0.05); ML385+1 nmol/L T3组较1 nmol/L T3组、ML385+0.5 nmol/L T3组较0.5nmol/L T3组、ML385+0.1 nmol/L T3组较0.1 nmol/L T3组面积修复率显著降低(P<0.05)。与正常组比较,H2O2组MDA、ROS水平及炎症因子IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05),而抗氧化物GSH、CAT和SOD水平降低(P<0.05)。ML385+1 nmol/L T3组较1 nmol/L T3组、ML385+0.5 nmol/L T3组较0.5 nmol/L T3组、ML385+0.1 nmol/L T3组较0.1 nmol/L T3组MDA、ROS、IL-6和TNF-α水平明显升高(P<0.05),GSH、CAT和SOD水平降低(P<0.05)。结论 T3减轻了H2O2诱导的氧化及炎性损伤,可能是通过激活Nrf2介导的抗氧化信号通路起作用。

• 单位
  西南医科大学; 解剖学教研室; 基础医学院