HSP-沙眼衣原体MOMP T细胞表位基因的重组、原核表达和蛋白质纯化

作者：杨思睿; 卫红飞; 孙景辉; 杨煜; 王燕媚; 鲁继荣; 于永利; 王丽颖

来源：吉林大学学报(医学版), 2006, (01): 11-14.

• 热休克蛋白65
• 衣原体
• 沙眼
• 表位
• T淋巴细胞
• 聚合酶链反应／方法
• 重组融合蛋白质类

目的:构建热休克蛋白65(HSP65)与沙眼衣原体(C．trachomatis,Ct)主要外膜蛋白(MOMP) T细胞表位(简称ctml)融合蛋白(简称H-ctml)的原核表达载体,并将其表达及纯化。方法:用PCR技术获得HSP65基因和ctml基因,并分别将其克隆入pMD18-T载体,采用酶切与连接的方法从pMD18-T载体上获得HSP65基因片段,并将其克隆入pET28a表达质粒,再用相同的方法将ctml基因连接于HSP65基因片段的下游,从而完成H-ctml的基因重组。用IPTG诱导转化H—ctml表达载体的大肠杆菌,以镍金属螯合亲和层析法纯化融合蛋白质。结果:构建了HSP65与ctml的表达载体pET28a-H—ctml,DNA序列测定结果表明构建正确。以镍金属螯合亲和层析获得纯度为98％的融合蛋白质。结论:用分子克隆技术正确构建HSP65与 Ct MOMP T细胞表位融合蛋白的表达载体,并成功表达与纯化出具有生物活性的融合蛋白。

• 单位
  吉林大学第一医院; 吉林大学