摘要
目的 观察深低温停循环下大鼠海马组织Nur77表达情况,探讨Nur77在深低温停循环对大鼠脑保护中的作用及可能机制。方法 45只SD大鼠均建立体外循环模型,随机分为对照组(常温不停循环20 min)15只,常温停循环组(常温10 min、停循环10 min)15只,深低温停循环组(深低温10 min、停循环10 min)15只。术后取3组大鼠海马组织行组织病理检查,采用DAPI染色测定神经细胞凋亡情况,应用透射电镜观察线粒体改变情况,采用Western blot法检测Nur77、Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、细胞色素C(cytochrome C, CytC)蛋白相对表达量及细胞核、细胞质Nur77蛋白相对表达量,采用实时荧光定量PCR法检测Nur77 mRNA相对表达量,采用免疫荧光法观察Nur77蛋白在细胞中的定位情况。结果 对照组海马组织神经细胞及线粒体形态结构正常,细胞核周边连续,染色分布均匀;常温停循环组大量神经细胞变性坏死,凋亡小体出现,线粒体肿胀,数量减少,嵴扭曲变形断裂;深低温停循环组少量神经细胞变性坏死,线粒体轻微肿胀,膜较完整。3组大鼠海马组织Nur77 mRNA和蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。对照组海马区Nur77主要分布于细胞核,细胞质表达较少;常温停循环组细胞质Nur77表达较对照组和深低温停循环组增加。常温停循环组海马组织细胞核Nur77(0.34±0.07)及海马组织Bcl-2(0.11±0.02)蛋白相对表达量均低于对照组(2.12±0.18、0.86±0.09)、深低温停循环组(1.79±0.11、0.34±0.04)(P<0.05),深低温停循环组均低于对照组(P<0.05);常温停循环组细胞质Nur77(0.74±0.05)及海马组织Bax(0.74±0.08)、caspase-3(0.86±0.09)、caspase-9(0.98±0.11)、CytC(0.92±0.08)蛋白相对表达量均高于对照组(0.12±0.02、0.13±0.03、0.13±0.02、0.17±0.03、0.14±0.02)、深低温停循环组(0.21±0.03、0.22±0.04、0.31±0.05、0.43±0.07、0.36±0.06)(P<0.05),深低温停循环组均高于对照组(P<0.05)。结论 Nur77参与深低温停循环对大鼠的脑保护作用,其机制可能为深低温阻止Nur77从细胞核易位至细胞质线粒体,抑制神经细胞凋亡和线粒体损伤。
-
单位首都医科大学附属北京儿童医院