PCR-Flow定量检测外周血嵌合体方法的建立及临床应用

作者：王仁定; 陈江华; 李敏伟; 吴建永; 方廉廉; 何强

来源：肾脏病与透析肾移植杂志, 2004, 13(01): 55-59.

DOI：10.3969/j.issn.1006-298X.2004.01.013

• 嵌合体
• 肾移植
• PCR-Flow

目的:建立能定量检测肾移植术后供体来源细胞(嵌合体)的PCR-Flow方法。 方法:利用细胞内聚合酶链反应(PCR)结合流式细胞仪、琼脂凝胶电泳、凝胶成像分析、荧光显微镜等技术,用两位人类白细胞DR抗原(HLA-DR)位点不同献血者外周血单核细胞,模拟供受体细胞混合(嵌合体),进行实验可行性和准确性研究,并对实验进行特异性分析。在此基础上对本院1999年1月至2001年12月进行肾移植联合供体骨髓细胞(donor bone marrow cell, DBMC)输注36例(DBMC组)及未进行骨髓输注的同一供体配对患者26例(配对对照组)移植术后嵌合体进行动态检测。 结果:模拟的嵌合体百分比与PCR-Flow检测嵌合体百分比呈直线关系,且方法的敏感性为0.05%,为特异性扩增。DBMC组术后4周和8周嵌合体与配对对照组相比明显增加,分别为(9.208.03)%与(1.292.05)% (P<0.01),和(7.73 7.35)%与(0.761.93)%(P<0.01)。但8周以后各个时间点两组之间无统计学差别。 结论:PCR-Flow检测嵌合体方法可靠、敏感性和特异性高,是检测外周血中微量嵌合体的新方法。

• 单位
  浙江大学附属第一医院