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摘要
目的构建表达人IFNγ的靶向小环质粒及其对照质粒,并观察其在EBV阳性鼻咽癌细胞中的靶向表达。方法采用分子克隆的方法构建中间靶向质粒p SP72-ori P-IFNγ-poly A(p SP72-ori P-IFNγ)和对照质粒p SP72-CMV-IFNγ-poly A(p SP72-CMV-IFNγ)。对其分别做双酶切,定向克隆于母环质粒p2ФC31中,构建成p2ФC31-ori P–IFNγ和p2ФC31-CMV-IFNγ质粒。转化TOP10细菌后,通过介导分子内重组,降解原核骨架,获取只含目的基因表达盒的靶向小环质粒mc-ori P-IFNγ和对照质粒mc-CMV-IFNγ。将小环质粒分别转染EBV阴性细胞和EBV阳性细胞,采用ELISA方法定量检测小环质粒介导目的基因的靶向表达。结果构建了靶向性母环质粒p2ФC31-ori P–IFNγ及其对照质粒p2ФC31-CMVIFNγ,并诱导纯化出相应的靶向性小环质粒mc-ori P-IFNγ及其对照质粒mc-CMV-IFNγ,通过转染真核细胞,检测出靶向性小环质粒能够介导IFNγ在EBV阳性鼻咽癌细胞中特异表达。结论成功构建了靶向性小环质粒mc-ori P-IFNγ,并证明其能够特异性地介导目的基因在EBV阳性鼻咽癌细胞中表达,而在EBV阴性鼻咽癌细胞及正常细胞中不表达。
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单位华南肿瘤学国家重点实验室; 广东医学院附属医院; 中山大学肿瘤防治中心
