靶向小鼠核因子κB P65的小干扰RNA逆转录病毒载体的构建与鉴定

作者：靳丽妍; 朱光发; 吴春婷; 闫树凤

来源：中国呼吸与危重监护杂志, 2011, (04): 335-339.

• 急性肺损伤
• 核因子κB
• RNA干扰
• 逆转录病毒载体 Acute lung injury
• Nuclear factor-κB
• RNA interfering
• Retrovirus vector

目的构建靶向小鼠核因子κB(NF-κB)P65进行RNA干扰(RNAi)的逆转录病毒载体,鉴定其生物学效应。方法采用分子克隆技术构建靶向小鼠NF-κB P65 siRNA的逆转录病毒载体,转染293E细胞,包装成逆转录病毒,以不同滴度感染小鼠单核巨噬细胞J774A.1,用相同浓度的脂多糖(LPS)刺激,在不同时间点用RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白水平上检测细胞NF-κBP65表达,并用RT-PCR和ELISA方法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果成功构建靶向小鼠NF-κB P65基因的小干扰RNA逆转录病毒表达载体。经LPS刺激后,siRNA病毒组J774A.1...

• 单位
  首都医科大学附属北京安贞医院