伪狂犬病病毒Ea株ORF-1基因在BHK-21细胞上的表达

作者：徐引弟; 陈焕春; 肖少波

来源：河南农业科学, 2009, (03): 99-102.

DOI：10.15933/j.cnki.1004-3268.2009.03.028

• 伪狂犬病病毒
• ORF-1基因
• 克隆
• 表达 PRV
• ORF-1 gene
• Cloning
• Expression

以伪狂犬病毒Ea株BamHⅠ5′片段为模板,PCR扩增出约0.6kbORF-1基因完整编码区序列,将该基因克隆到pBluescriptⅡSK+中,构建重组载体pSKORF1。进一步将该片段插入真核表达载体pEGFP-C1的增强型绿荧光蛋白EGFP下游,构建真核表达载体pEGFPORF1,脂质体法转染BHK-21细胞,G418加压筛选至正常细胞完全死亡。在倒置荧光显微镜下观察,可见pEGFPORF1转染的细胞在细胞膜和细胞浆中发出较强的荧光,证明ORF-1基因在BHK-21细胞中获得了表达。