蛋白L突变体的表达纯化及其亲和色谱填料制备

作者：夏名轩; 吴勇; 白道军; 冯军

来源：中国医药工业杂志, 2023, 54(03): 357-365.

DOI：10.16522/j.cnki.cjph.2023.03.009

• 蛋白L突变体
• 离子交换层析
• 固定化
• 动态结合载量

蛋白L(Protein L)是由大消化链球菌(Peptostreptococcus magnus)产生的一种细胞壁表面蛋白，可与带有kappa轻链的抗体特异性结合，是抗体纯化的重要工具之一。目前国内市场在售的Protein L亲和填料种类少、价格昂贵，且在载量与耐碱性能上存在较大的提升空间。该研究采用构建的耐碱突变Protein L表达菌株DMR582，通过高密度发酵、聚乙烯亚胺(PEI)抽提、预处理及阳离子交换柱色谱纯化获得纯度达96.7%的Protein L，并将其固定于环氧活化琼脂糖介质上，制备得Protein L亲和色谱填料。经参数优化，其对抗体片段Fab在10%穿透下的动态结合载量(DBC10%)达到35 mg/(mL填料)。采用100 mmol/L氢氧化钠溶液模拟50次在位清洗(CIP)后测得其DBC10%为初始值的73.9%，比原始序列配体填料高。在15 mmol/L氢氧化钠溶液模拟100次CIP后其DBC10%仍能保持在初始值的89.6%，与在售产品Capto L填料耐碱性相当。

• 单位
  生命科学学院; 上海师范大学