能量限制激活Sirt1减轻心肌细胞缺血/再灌注损伤的作用

作者：李珊; 吕安林; 王海昌; 邱翠婷; 马晓磊; 姜晓宇; 郭显

来源：心脏杂志, 2016, 28(04): 405-410.

DOI：10.13191/j.chj.2016.0108

• 能量限制
• 沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ
• 缺血/再灌注损伤

目的研究能量限制(calorie restriction,CR)激活沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(Sirt1)在缺血/再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,I/RI)中对心肌细胞的保护作用及其机制。方法心肌细胞系H9c2以5×105/L接种于6孔细胞培养板中,随机分为4组:对照(Con)组、缺氧复氧(hypoxia/re-oxygenation,H/R)组、H/R+低糖预处理(H/R+CR)组和H/R+低糖预处理+Sirt1抑制剂EX527(H/R+CR+EX527)组,其中Con和H/R组使用葡萄糖浓度为4.5 g/L的培养基,而H/R+CR组和H/R+CR+EX527组则使用葡萄糖浓度为1.5 g/L的培养基,每组设置3个复孔,进行缺氧5 h复氧1 h,用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的活性,末端标记法(TUNEL)染色法检测细胞的凋亡水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Sirt1和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(P-AMPK)的表达。结果与H/R组(0.31±0.06)相比,H/R+CR组(0.11±0.02)细胞内ROS的水平明显减少(P<0.05);H/R+CR+EX527组(0.55±0.06)细胞内ROS的水平明显增多(P<0.05);与H/R组(0.23±0.01)相比,H/R+CR组(0.64±0.02)细胞活性明显上升(P<0.05);H/R+CR+EX527组(0.09±0.005)细胞活性明显下降(P<0.05);与H/R组(0.444±0.038)相比,H/R+CR组(0.222±0.556)细胞凋亡水平明显降低(P<0.05);H/R+CR+EX527组(0.578±0.0129)细胞凋亡水平明显提高(P<0.05);与H/R组(2.229±0.019)相比,H/R+CR组(3.712±0.010)Sirt1的表达水平明显增加(P<0.05);而H/R+CR+EX527组(1.603±0.134)Sirt1的表达水平明显降低(P<0.05);与H/R相(1.262±0.064)比,H/R+CR组(1.893±0.122)P-AMPK的表达水平明显增加(P<0.05);而H/R+CR+EX527组(0.734±0.069)P-AMPK的表达水平明显降低(P<0.05)。结论在I/RI中,CR可能通过AMPK途径激活Sirt1,进而发挥心肌保护作用。

• 单位
  第四军医大学; 西京医院