转染小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子稳定表达细胞株的筛选与鉴定

作者：傅春华; 田聆; 魏于全; 阚兵; 李炯; 文艳君

来源：生物医学工程学杂志, 2004, (06): 897-900.

• 可溶性B淋巴细胞刺激因子
• 基因转染
• 稳定表达

用脂质体包裹纯化的小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子 (msBlyS)重组表达质粒 ,体外转染小鼠结肠癌细胞系CT2 6 ,通过Zeosin抗性筛选获得抗性的单克隆肿瘤细胞株。提取细胞总RNA做半定量RT PCR ,鉴定出高表达msBlyS的稳定细胞克隆 ,进一步做Western blotting鉴定和生物活性测定。转染后得到 8个单克隆抗性肿瘤细胞株 ,其中有 5个经RT PCR扩增出msBlyS目的条带。Western blotting显示该克隆株细胞裂解物可与抗msBlyS的抗体结合 ,在杂交膜上形成一条与预期蛋白分子量一致的条带。生物活性测定显示细胞分泌上清可共刺激(Costimulate)体外培养的B淋巴细胞增殖 ,这表明已成功转染并筛选出msBlyS稳定表达小鼠结肠癌细胞株 ,可以进一步用于msBlyS抗肿瘤作用的观察和研究。

• 单位
  生物医学工程教育部重点实验室; 四川大学华西医院; 四川大学华西口腔医学院